Chất nội chuẩn

[pergularia_nl]

 Some criteria for choosing a suitable internal standard:
- The internal standard must have the same chemical, physical similar properties as that of the analyte, commonly, they’re analogs, homologs, isotopes, .. so it will have the same behaviors like the analyte during clean-up, sample procedure, ...
- Stable, high purity and not interfere with the analyte, don’t interact chemically or physically with analyte, matrix sample, and mobile phases.
- The similiar detector response to that of the analyte.
- The internal standard mustn’t overlap with the sample peak and elute near the peak of analyte.
- The internal standard must exists with very low concentration in the sample that its initial signal can’t be detected, ideally it shouldn’t be present naturally in the matrix sample.
- Commercially available.

[C.H.V]

Sử dụng phương pháp nội chuẩn trong phương pháp sắc kí khí (GC-FID) đây là phương pháp cho phép xác định chính xác nồng độ của chất quan tâm mà không bị ảnh hưởng đáng kể bởi thể tích tiêm mẫu giữa các lần tiêm (mg/l, ug/l, ppm, ppb…)

Để thực hiện cần tìm một chất có tính chất lý hóa và cấu trúc tương tự với các chất cần xác định.

Ví dụ: ta sử dụng chất nội chuẩn là toluene để xác định hàm lượng benzen trong mẫu.
Tại sao lại chọn toluene là chất nội chuẩn ?
--Giả sử ta chọn cyclohexane làm chất nội chuẩn, nó có cấu trúc tương tự Benzene nhưng có thể vì lý do này mà peak của Benzene sẽ bị trùng lặp một phần với peak của cyclohexane như thế sẽ khó để xác định được diện tích peak của cả hai để tính tỉ lệ diện tích.
--Chọn Naptalen là chất nội chuẩn, cấu trúc khác so với Benzene như thế thời gian lưu sẽ lâu hơn của Benzene rất nhiều, vì vậy thời gian chạy sắc ký sẽ rất lâu.
Kết luận: nên chọn chất nội chuẩn có cấu trúc tương tự với chất cần xác định (không quá tương tự để hai peak của hai chất không bị trùng lặp lên nhau) và nằm trong khoảng thời gian lưu không quá lâu hoặc quá sớm so với thời gian lưu của chất cần xác định.
Nguyên tắc xác định hàm lượng benzene là dựng một đường chuẩn giữa "tỉ lệ diện tích peak benzen/toluen" theo hàm lượng benzen có khoảng biến thiên chứa nồng độ cần xác định hàm lượng trong mẫu. Sau đó cũng xác định tỉ lệ diện tích peak của benzen/toluene và suy ra được hàm lượng benzen trong mẫu cần phân tích.

Chất nội chuẩn được thêm vào tất cả các dung dịch mẫu, chuẩn với nồng độ như nhau. Trong dung dịch tỉ lệ nồng độ giữa chất phân tích và chất nội chuẩn là hằng số, vì vậy tỉ lệ chiều cao hay diện tích peak của hai chất là hằng số. Khi bơm mẫu với hàm lượng nhỏ bằng tay thì có sai lệch thể tích giữa các lần tiêm mẫu nhưng tỉ lệ chiều cao hay diện tích vẫn không bị ảnh hưởng. Trên thực tế thể tích thay đổi nhiều thì tỉ lệ này cũng thay đổi dù không nhiều nên việc bơm mẫu lặp lại càng nhiều càng tốt.

Trong phần diện tích peak của cả Benzene và toluene giữa các lần tiêm mẫu khác nhau rất nhiều, nguyên nhân là việc tiêm mẫu bằng tay và nhìn ước lượng thể tích bằng mắt thường nên dẫn đến sai lệch như vậy, nhưng tỉ lệ diện tích của peak Benzene/toluene thì không khác nhau nhiều nếu dùng thêm chất nội chuẩn toluene.