Định lượng Vitamin

[tuannaphaco]

Cho tôi hỏi chút các bạn ơi.
Hiện tôi đang cần định lượng vitamin PP trong 1 mẫu siro (15mg/100 ml siro), tôi thử theo cách định lượng các vitamin tan trong nước như thông thường kia rồi mà không được. Các bạn có kinh nghiệm trong việc xử lý các mẫu siro giúp tôi với.

[PMP]

Nguyên văn bởi Ocean

Mình đã thử định lượng Vit.E trong một số hỗn hợp thì thấy có thể dùng cột C18, pha động là MeOH:ACN (95:5), dung dịch mẫu thử cũng chỉ cần hòa tan hoặc lắc siêu âm chất với MeOH, vận tốc dòng là 1ml/min và bước sóng cũng ở khoảng 284-286nm. Thời gian lưu cho Vit.E ở trường hợp này khoảng 6.3 - 6.4 min.
Mình chưa thử với Vit.A, mình gặp khó khăn khi hòa tan viên nan mềm trong MeOH, còn một số chất ở dạng dầu tách lớp trong MeOH, không biết làm cách nào để tách Vit.A ra khỏi lớp dầu một cách hiệu quả.
Định lượng các water-soluble vitamins thì mình có file đính kèm

+Minh thường làm định lượng vitamin A bằng cách đun hồi lưu (Áp dụng cho viên nang mềm)
- Cột C18
- MP: MeOH:H2O (90:10) hoặc điều chỉnh tỷ lệ nếu cần.
- Tốc độ dòng: 0,5 -0,7ml/phút
- Bước sóng: 330 nm
Thể tích tiêm: 20 ul
+Hóa chất-thuốc thử:
- MeOH (HPLC)
- Ethanol tuyệt đối (PA)
- BHT
-KOH (50%)
- n-Hexan
-Phenolphtalein
-Acid acetic băng
+Cách tiến hành:
- Dung dịch thử: Cân 20 viên nang bất kỳ để xác đinh khối lượng TBV
+Cân một lượng dịch thuốc tương đương 4000UI cho vào bình cầu, thêm 0.5 ml n-hexan, lắc nhẹ cho dịch thuốc rã. Thêm 30 ml Ethanol,thêm 3 ml KOH, 0,1g BHT và thêm một ít đá bọt (hoặc viên bi thủy tinh) đun hồi lưu trên bếp cách thủy 30 phút. Sau đó, làm lạnh nhanh bằng cách ngâm trong nước đá (nhằm làm đông tụ tá dược), cho vài giọt phenolphtalein, trung hòa bằng acid acetic băng. Cho vào bình định mức 100 ml, thêm ethanol vừa đủ 100 ml. Lọc qua màng lọc 0,45 ul. Tiêm vào hệ thống sắc ký.
- Dung dich chuẩn: Cân một lượng dầu đậu nành khoảng 2500 mg cho vào bình cầu.
+ Cân 4000 UI Retinyl palmitat chuẩn cho vào bình định mức 100 ml. Thêm 70 ml ethanol. Lắc kỹ cho tan hoàn toàn, thêm ethanol vừa đủ 100 ml.
+ Hút chính xác 5 ml dung dịch chuẩn cho vào bình cầu có chứa sẵn dầu đậu nành, thêm 25 ml ethanol,thêm 3 ml KOH, 0,1g BHT và thêm một ít đá bọt (hoặc viên bi thủy tinh) đun hồi lưu trên bếp cách thủy 30 phút. Sau đó, làm lạnh nhanh bằng cách ngâm trong nước đá , cho vài giọt phenolphtalein, trung hòa bằng acid acetic băng. Cho vào bình định mức 100 ml, thêm ethanol vừa đủ 100 ml. Lọc qua màng lọc 0,45 ul. Tiêm vào hệ thống sắc ký.